詳細介紹
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現貨 |
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應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,農業,制藥 |
超氧陰離子測試盒
微量法100T/96S
注意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
生物體內超氧陰離子等活性氧具有免疫和信號傳導的作用,但積累過多時會對細胞膜及生物大分子產生破壞作用,導致機體細胞和組織代謝異常,從而引起多種疾病。
測定原理:
超氧陰離子與鹽酸羥胺反應生成NO2-,NO2-在對氨基苯磺酸和α-萘胺的作用下,生成紅色的偶氮化合物,在530nm處有特征吸收峰,根據ΔA值可以計算樣品中O2-含量,反應式為NH2OH + 2O2- +H+ → NO2- + H2O2 + H2O。
自備實驗用品及儀器:
天平、水浴鍋、離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、氯仿和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體110mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體20mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體15mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑三:液體15mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑四:氯仿,自備。
超氧陰離子提取
植物、動物組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進行冰浴勻漿,然后,10000g,4℃,離心20min,取上清置于冰上待測。
細菌、真菌:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后10000g,4℃,離心20min,取上清置于冰上待測。
血清或培養液:直接測定。
測定操作表
分光光度計/酶標儀預熱30min,調節波長至530nm。
操作表
空白管 | 測定管 | |
樣本(μL) | 200 | |
提取液(μL) | 200 | |
試劑一(μL) | 160 | 160 |
混勻,37℃水浴20min | ||
試劑二(μL) | 120 | 120 |
試劑三(μL) | 120 | 120 |
混勻,37℃水浴20min | ||
試劑四(μL) | 200 | 200 |
混勻,8000g,25℃,離心5min,小心吸取上層水相200μL于微量石英比色皿/96孔板中,測定A530。ΔA=A測定-A空白,空白管只要做一管。 |
超氧陰離子含量計算公式
用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線:y = 0.0242x - 0.0027,R2=0.9980
1. 組織:
(1)按照樣本質量計算
超氧陰離子含量(nmol/g 鮮重)= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反總÷(V樣÷V樣總×W)×2
=148.76×(ΔA+0.0027)÷W
超氧陰離子產生速率(nmol/ g·min)=148.76×(ΔA+0.0027)÷W÷T
=7.44× (ΔA+0.0027)÷W
(2)按照蛋白質濃度計算
超氧陰離子含量(nmol/mg prot)= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反總÷(V樣×Cpr)×2
=148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr
超氧陰離子產生速率(nmol/ mg prot·min)= 148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr÷T
=7.44× (ΔA+0.0027)÷Cpr
2. 細菌,真菌:
超氧陰離子含量(nmol/104 cell)= (ΔA+0.0027)÷0.0242× V反總÷(V樣÷V樣總×細胞數量)×2
= 148.76×(ΔA+0.0027)÷細胞數量
超氧陰離子產生速率(nmol/104 cell·min)= 148.76×(ΔA+0.0027)÷細胞數量÷T
=7.44× (ΔA+0.0027)÷細胞數量
3. 血清或培養液
超氧陰離子 含量(nmol/mL)= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反總÷V樣×2
=148.76× (ΔA+0.0027)
超氧陰離子產生速率(nmol/mL·min)= 148.76× (ΔA+0.0027) ÷T
= 7.44× (ΔA+0.0027)
V樣總:加入提取液體積,1 mL; V反總:反應總體積,0.36mL;V樣:反應中樣品體積,0.2mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣品質量,g;T:反應時間,20min;2: 2分子O2-參與反應生成1分子NO2-。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線:y = 0.0121x - 0.0027,R2 = 0.9980
1. 組織:
(1)按照樣本質量計算
超氧陰離子含量(nmol/g 鮮重)= (ΔA+0.0027)÷0.0121×V反總÷(V樣÷V樣總×W)×2
=297.52× (ΔA+0.0027)÷W
超氧陰離子產生速率(nmol/ g·min)=297.52× (ΔA+0.0027)÷W÷T
=14.88× (ΔA+0.0027)÷W
(2)按照蛋白質濃度計算
超氧陰離子含量(nmol/mg prot)= (ΔA+0.0027)÷0.0121×V反總÷(V樣×Cpr)×2
=297.52× (ΔA+0.0027)÷Cpr
超氧陰離子產生速率(nmol/ mg prot·min)= 297.52× (ΔA+0.0027)÷Cpr÷T
=14.88× (ΔA+0.0027)÷Cpr
2. 細菌,真菌:
超氧陰離子含量(nmol/104 cell)=(ΔA+0.0027)÷0.0121× V反總÷(V樣÷V樣總×細胞數量)×2
=297.52× (ΔA+0.0027)÷細胞數量
超氧陰離子產生速率(nmol/104 cell·min)=297.52× (ΔA+0.0027)÷細胞數量÷T
=14.88× (ΔA+0.0027)÷細胞數量
3. 血清或培養液
超氧陰離子 含量(nmol/mL)=(ΔA+0.0027)÷0.0121 ×V反總÷V樣×2
=297.52×(ΔA+0.0027)
超氧陰離子產生速率(nmol/mL·min)= 297.52×(ΔA+0.0027) ÷T
=14.88×(ΔA+0.0027)
V樣總:加入提取液體積,1 mL; V反總:反應總體積,0.36mL;V樣:反應中樣品體積,0.2mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣品質量,g;T:反應時間,20min;2:2分子O2-參與反應生成1分子NO2-。
注意事項
OD值大于1,樣品適當稀釋再測定,注意計算公式里乘以稀釋倍數。
樣品制備好后,立刻進行測定,請勿將樣品進行長時間的低溫保存,以免影響測定結果。
試劑四有一定的毒性,請操作時做好防護措施。
上海牧榮生物科技有限公司
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