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濾紙酶測(cè)試盒

簡(jiǎn)要描述:濾紙酶測(cè)試盒 濾紙酶(Filter paper Activity,F(xiàn)PA)試劑盒 上海牧榮生物科技有限公司專(zhuān)業(yè)實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)品.為客戶(hù)全面解決實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)、開(kāi)發(fā)需求,提供方便、快捷的服務(wù)。

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):代理商
  • 更新時(shí)間:2024-05-09
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詳細(xì)介紹

品牌其他品牌供貨周期現(xiàn)貨
應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥

濾紙酶測(cè)試盒

微量法100T/48S

測(cè)定意義

纖維素酶是由微生物產(chǎn)生的多組分的酶系,能水解纖維素β-1,4葡萄糖苷鍵生成葡萄糖,研究濾紙酶活力對(duì)纖維素酶的研究具有非常重要的意義。

測(cè)定原理

濾紙酶水解濾紙產(chǎn)生的還原糖能與3,5-二硝基水楊酸生成紅棕色氨基化合物,在540nm處有最大光吸收,在一定范圍內(nèi)反應(yīng)液顏色深淺與還原糖的量成正比,可測(cè)定計(jì)算得濾紙酶的活力。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

天平、研缽、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。

試劑組成和配制

試劑一:液體25mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體40mL×1瓶,4℃保存。

濾紙條:50mg×50條。

酶液提取

  1. 組織:按照質(zhì)量(g):蒸餾水體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g,加入1mL蒸餾水)加入蒸餾水,冰浴勻漿后于4℃,12000rpm離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。

  2. 細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):蒸餾水體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后4℃,12000rpm離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。

  3. 培養(yǎng)液或其它液體:直接檢測(cè)。

測(cè)定操作

  1. 根據(jù)樣本數(shù)量取兩倍數(shù)量的濾紙條和Ep管,每支Ep管中放入一個(gè)卷狀濾紙條(注意要放入底部),作為底物。

  2. 對(duì)照管:取200μL滅活的酶液,加入500μL試劑一,充分混勻,再加入放有濾紙條的Ep管中,標(biāo)注為對(duì)照管。

  3. 測(cè)定管:取200μL酶液,加入500μL試劑一,充分混勻,再加入放有濾紙條的Ep管中,標(biāo)注為測(cè)定管。

  4. 對(duì)照管和測(cè)定管同時(shí)置于50℃水浴鍋中反應(yīng)30min。

  5. 加入800μL試劑二,沸水浴5min,自來(lái)水冷卻后取200μL于微量石英比色皿/96孔板中測(cè)定540nm處吸光值,分別記為A對(duì)照管和A測(cè)定管,△A= A測(cè)定管- A對(duì)照管。

酶活性計(jì)算公式

  1. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn):y = 0.2805x - 0.0255,R2 = 0.9991

(1)按照蛋白濃度計(jì)算

酶活性定義在50℃,pH4.6條件下,每毫克蛋白每分鐘分解濾紙產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

FPA(U/mg prot)=(△A+0.0255)÷ 0.2805×V反總÷(V樣×Cpr)÷T

= 0.891×(△A+0.0255)÷ Cpr

(2)按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活性定義在50℃,pH4.6條件下,每克組織每分鐘分解濾紙產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

FPA(U/g)=(△A+0.0255)÷ 0.2805×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T

= 0.891×(△A+0.0255)÷ W

(3)按液體體積計(jì)算

酶活性定義在50℃,pH4.6條件下,每毫升培養(yǎng)液每分鐘分解濾紙產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

FPA(U/mL)=(△A+0.0255)÷ 0.2805×V反總÷V樣÷T

= 0.891×(△A+0.0255)

(4)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活性定義在50℃,pH4.6條件下,每104個(gè)細(xì)胞每分鐘分解濾紙產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

FPA(U/104cell)=(△A+0.0255)÷ 0.2805×V反總÷(V樣×細(xì)胞數(shù)量(萬(wàn)個(gè))÷V樣總)÷T

= 0.891×(△A+0.0255)÷ 細(xì)胞數(shù)量(萬(wàn)個(gè))

V反總:反應(yīng)總體積,1.5mL,V樣:反應(yīng)體系中加入樣本體積,0.2mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,30min

  1. 用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn):y = 0.1403x - 0.0255,R2 = 0.9991

(1)按照蛋白濃度計(jì)算

酶活性定義在50℃,pH4.6條件下,每毫克蛋白每分鐘分解濾紙產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

FPA(U/mg prot)=(△A+0.0255)÷ 0.1403×V反總÷(V樣×Cpr)÷T

=1.782×(△A+0.0255)÷ Cpr

(2)按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活性定義在50℃,pH4.6條件下,每克組織每分鐘分解濾紙產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

FPA(U/g)=(△A+0.0255)÷ 0.1403×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T

= 1.782×(△A+0.0255)÷ W

(3)按液體體積計(jì)算

酶活性定義在50℃,pH4.6條件下,每毫升培養(yǎng)液每分鐘分解濾紙產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

FPA(U/mL)=(△A+0.0255)÷ 0.1403×V反總÷V樣÷T

= 1.782×(△A+0.0255)

(4)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活性定義在50℃,pH4.6條件下,每104個(gè)細(xì)胞每分鐘分解濾紙產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

FPA(U/104cell)=(△A+0.0255)÷ 0.1403×V反總÷(V樣×細(xì)胞數(shù)量(萬(wàn)個(gè))÷V樣總)÷T

= 1.782×(△A+0.0255)÷ 細(xì)胞數(shù)量(萬(wàn)個(gè))

V反總:反應(yīng)總體積,1.5mL,V樣:反應(yīng)體系中加入樣本體積,0.2mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,30min


注意事項(xiàng)

  1. 用干凈的鑷子取出濾紙條,帶手套卷成卷放入Ep管底部。

  2. 樣本滅活時(shí)保證同一批樣本處理時(shí)間一致,建議沸水浴十分鐘。

  3. 批量樣本測(cè)定之前先做1-2個(gè)樣本的預(yù)實(shí)驗(yàn),若吸光值超過(guò)1.2,建議將樣本用蒸餾水稀釋后再進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

  4. 顯色后取檢測(cè)液時(shí)注意槍頭不要碰到濾紙條,以免帶入毛狀物,影響測(cè)定結(jié)果。


上海牧榮生物科技有限公司

  1. 國(guó)內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷(xiāo)代理。

  2. 國(guó)外試劑的訂購(gòu)。可提供歐美實(shí)驗(yàn)室品牌的采購(gòu)方案。

  3. 提供加急物流處理,進(jìn)口貨物,最快交期1-2周。

  4. 進(jìn)出口貨物代理服務(wù)。

  5. 公司代理眾多有名生命科學(xué)領(lǐng)域的研究試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品品牌:CELL DATA,Alamanda Polymers, cstti,Click Chemistry tools,Nanoprobes,Ancell,NANOCS,Ambeed, Inc,SPEED BioSystems, LLC,Tulip Biolabs, Inc,Torrey Pines Biolabs,magsphere ,FabGennix International ,paratechs,Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點(diǎn)合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

  6. 質(zhì)量保證,所有產(chǎn)品都提供售后服務(wù)。付款方式靈活。公司堅(jiān)持“一站式"服務(wù)模式,為客戶(hù)全面解決實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)、開(kāi)發(fā)需求。公司整合國(guó)際與國(guó)內(nèi)資源,加強(qiáng)網(wǎng)絡(luò)建設(shè),提高公司內(nèi)部運(yùn)作效率,為客戶(hù)提供方便、快捷的服務(wù)。

  7. 公司突出創(chuàng)新思維,提高工作效能,減低運(yùn)作成本,為客戶(hù)提供優(yōu)惠的價(jià)格。

濾紙酶測(cè)試盒




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