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硝酸還原酶(NR)測試盒

簡要描述:硝酸還原酶(NR)測試盒 硝酸還原酶(Nitrate Reductase,NR)活性測定試劑盒 上海牧榮生物科技有限公司專業(yè)實驗室產(chǎn)品.為客戶全面解決實驗、生產(chǎn)、開發(fā)需求,提供方便、快捷的服務(wù)。

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):代理商
  • 更新時間:2024-05-09
  • 訪  問  量:145

詳細介紹

品牌其他品牌供貨周期現(xiàn)貨
應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥

硝酸還原酶(NR)測試盒

微量法 100管/48樣

正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義

NR( EC 1.7.1.3)廣泛存在于植物中,是植物硝態(tài)氮轉(zhuǎn)化為氨態(tài)氮的關(guān)鍵酶,也是誘導(dǎo)酶,對作物的產(chǎn)量和品質(zhì)有影響。

測定原理

NR催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,NO3ˉ +NADH+H+→ NO2ˉ +NAD+ +H 2 O;產(chǎn)生的亞硝酸鹽能夠在酸性條件下,與對–氨基苯磺酸及 α - 萘胺定量生成紅色偶氮化合物;生成的紅色偶氮化合物在 540 nm 有最大吸收峰,可用分光光度法測定。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制

誘導(dǎo)劑儲備液:液體50mL×1瓶,4℃保存。

提取液:液體60mL×1瓶,4℃保存。

試劑一:液體10mL×1瓶,-20℃保存。

試劑二:液體5mL×1瓶,-20℃保存;

試劑三:液體6mL×1瓶,4℃保存(如出現(xiàn)結(jié)晶析出,60℃-90℃水浴溶解后使用);

試劑四:液體6mL×1瓶,4℃保存。

試劑五:標(biāo)準(zhǔn)儲備液1mL,-20℃保存。

誘導(dǎo)劑應(yīng)用液的配制:用時將誘導(dǎo)劑儲備液稀釋10倍,即取10mL誘導(dǎo)劑儲備液加90mL蒸餾水,充分混勻。

0.1umol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液的配制:用時將試劑五稀釋100倍,即取 0.1ml試劑五加9.9mL蒸餾水,充分混勻。

樣本前處理

動植物組織樣品的前處理:

(1)取適量誘導(dǎo)劑于燒杯中,將新鮮標(biāo)本洗凈,濾紙吸干,放入誘導(dǎo)劑應(yīng)用液中(淹沒即可),浸泡2h,取出樣本,濾紙吸干。

(2)按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

注意:

  1. 建議使用新鮮沒有冷凍過的樣本。

  2. 一般不要誘導(dǎo)處理,預(yù)測定結(jié)果沒有活性(A測定≤A對照管)則需要誘導(dǎo)處理。

細菌或培養(yǎng)細胞的前處理:

先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。





測定步驟

1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至540nm,蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測定(在EP管或96孔板中加入下列試劑)

試劑名稱(μL)

加樣孔

測定管

對照管

標(biāo)準(zhǔn)管

空白管

樣本

20

20



0.1μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液



20


蒸餾水


75


95

試劑一

75


75


試劑二

25

25

25

25

混勻后,37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)反應(yīng)30min

試劑三

50

50

50

50

試劑四

50

50

50

50

混勻,25℃室溫顯色20min,540nm處比色

注意:1、標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需測一次,每個測定管設(shè)一個對照管。

2、誘導(dǎo)處理后的樣本對照管中試劑二改成加25μL蒸餾水。

NR活性計算:

(1)按樣本鮮重計算:

單位定義:每小時每g鮮重樣品中催化產(chǎn)生 1μmol NO2ˉ的量為一個 NR活力單位。

NR(μmol/h/g 鮮重)= (C標(biāo)準(zhǔn)管×V1)×(A測定管-A對照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷(W×V1÷V2)÷T=0.2×(A測定管-A對照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷W

(2)按樣本蛋白濃度計算:

單位定義:每小時每mg組織蛋白催化產(chǎn)生 1μmol NO2ˉ的量為一個 NR活力單位。

NR(μmol/h/mg prot)=(C標(biāo)準(zhǔn)管×V1)×(A測定管-A對照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷(V1×Cpr)÷T=0.2×(A測定管-A對照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷Cpr

C標(biāo)準(zhǔn)管:標(biāo)準(zhǔn)管濃度,0.1μmol/mL;V1:加入樣本體積:0.02mL;V2:加入提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時間,0.5h;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g。


上海牧榮生物科技有限公司

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  7. 公司突出創(chuàng)新思維,提高工作效能,減低運作成本,為客戶提供優(yōu)惠的價格。

硝酸還原酶(NR)測試盒




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