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潮霉素B

簡要描述:潮霉素B/濕霉素乙/效高素/Hygromycin B 上海牧榮生物科技有限公司專業實驗室產品

  • 產品型號:
  • 廠商性質:代理商
  • 更新時間:2024-04-25
  • 訪  問  量:152

詳細介紹

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應用領域醫療衛生,化工,生物產業,農業,制藥

潮霉素B/濕霉素乙/效高素/Hygromycin B

CAS:31282-04-9
分子式:C20H37N3O13  
分子量:527.52
純度:>90%
化學性質:白色至類白色粉末,易溶于水、甲醇和乙醇。

用途:生化研究

作用機制:  

潮霉素B是由吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代謝產生的一種氨基糖苷類抗生素,通過抑制蛋白質合成而殺死細菌、真菌和高等真核細胞。潮霉素B通過干擾70S核糖體易位和誘導對mRNA模板的錯讀而抑制蛋白合成。目前常用于篩選和維持培養含潮霉素抗性基因的原核或真核細胞。

抗性基因:

潮霉素B的抗性源自編碼潮霉素B磷酸轉移酶(Hph)的基因。至今發現兩種來源:

? Streptomyces hygroscopicus產生的Hph抗性基因;

? Escherichia coliKlebsiella pneumoniae內質粒攜帶的Hph抗性基因(常用);  

生物應用:

1)   篩選和維持培養穩定轉染Hph+載體的原核細胞或真核細胞(植物細胞和哺乳動物細胞);

2)   由于作用模式的差異,常與G418 (GeneticinTM),Zeocin™ 和blasticidin S聯合使用,篩選穩定轉染兩個不同載體的細胞株;

雙抗性穩定轉染細胞篩選的抗生素作用機制及抗性

抗生素

抗性機制

抗性基因

哺乳動物篩選濃度

潮霉素B

干擾70S核糖體易位和誘導對mRNA模板的錯讀

Hph

200~500μg/mL

G418

干擾80S核糖體功能和抑制蛋白合成

Tn5/Tn601

100~1000μg/mL

Zeocin

摻入或者切割DNA引起細胞死亡

Sh ble

50~100μg/mL

blasticidin S

核糖體上抑制肽鍵形成

Bsd/BSD

3~50μg/mL

3)抗病毒劑,由于潮霉素B選擇性滲透進入因病毒感染增強通透性的細胞,而且具有抑制翻譯的功效;

4)作為驅蟲藥加入動物飼料;

應用濃度:

潮霉素B用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型,培養基,生長條件和細胞代謝率而變化。推薦使用濃度為50-1000 μg/mL,*佳濃度需要殺滅曲線來確定。

哺乳動物細胞·200-500 μg/mL;細菌/植物細胞·100-300 μg/mL;真菌·300-1000 μg/mL;

產品使用:

使用一:殺滅曲線確定*佳殺死濃度(僅作參考,因個人檢測體系而異)

(1)往組織培養級的96孔板內加入未轉染細胞,細胞密度約50-200細胞/孔;細胞貼壁之后,往每孔加入含不同濃度(如50-1000μg/mL,至少5個濃度)潮霉素B的200μL新鮮培養基;

(2)37℃,5% CO2培養箱孵育細胞10-14天;

(3)培養5-7天后更換新的培養液,培養液內含有相應濃度的潮霉素B

(4)10-14天后使用細胞增殖方法如MTT,CCK-8等評估細胞活力;也可以通過檢測細胞克隆數或百分比匯合率來確定毒性效應。一般選擇在10-14天能夠殺死所有細胞的*小濃度為*佳篩選濃度。

使用二:篩選穩定轉染細胞

(1)         對于貼壁細胞,直接吸去60mm培養皿內的轉染細胞培養基,然后加入含有潮霉素B的新鮮培養基5-6ml;對于懸浮細胞,無菌條件250x g,離心10min除去舊的轉染細胞培養基,然后懸浮在約5ml的含潮霉素B的新鮮培養基;

(2)         5-7天后,如上方法更換含有潮霉素B的新鮮培養基;

(3)         再孵育細胞5-7天;

(4)         10-14天孵育后,培養體系中只含有能夠表達潮霉素B抗性表型的活細胞。因此篩選之后如步驟一,更換不含潮霉素B的新鮮培養基。


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潮霉素B/濕霉素乙/效高素/Hygromycin B

















































































































































































































































































































































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