Bst DNA 聚合酶，大片段是來自克隆到大腸桿菌的嗜熱脂肪芽孢桿菌的中等熱穩(wěn)定性酶。它具有嗜熱逆轉(zhuǎn)錄酶活性，并且在各種反應(yīng)緩沖液條件和鎂離子濃度下均具有活性。該聚合酶表現(xiàn)出強(qiáng)大的鏈置換能力，使其成為等溫?cái)U(kuò)增 (LAMP)、全基因組擴(kuò)增 (WGA) 和多重置換擴(kuò)增 (MDA) 的理想候選者。

Bst DNA 聚合酶（減去核酸外切酶）是一種 67 kDa 嗜熱脂肪芽孢桿菌 DNA 聚合酶蛋白，具有 5'-3' 聚合酶活性、鏈置換活性和逆轉(zhuǎn)錄活性。沒有可檢測到的 3'-5' 核酸外切酶活性。濃度為10 U/ul。

應(yīng)用

等溫 DNA 擴(kuò)增、LAMP、DNA 鏈置換擴(kuò)增、全基因組擴(kuò)增、對具有高 CG 含量和有問題的二級結(jié)構(gòu)的 DNA 進(jìn)行測序、從極少量的 DNA 模板 (10 fg) 進(jìn)行快速測序和擴(kuò)增。 LAMP 測定：2.5 ul 10x BST 緩沖液、0.8 ul MgSO4 (25 mM)、dNTP (10 mM)、4 ul 甜菜堿 (5M)、1.6 ul mecA FIP 引物 (10 mM)、1.6 ul mecA BIP 引物 (10 mM)、0.2 ul mecA F3 引物 (10 mM)、0.2 ul mecA B3 引物 (10 mM)、0.1 mg/ml BSA、1 ul BST 聚合酶、1 ul 模板 DNA，10， 5 ul 水。參考文獻(xiàn)：Changguo Chen、Qiangyuan Zhu、Jianwei Mao、Yanjun Li (2017)：通過環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增 (LAMP) 同時(shí)檢測 mecA、nuc 和 femB 來鑒定耐甲氧西林金黃色葡萄球菌 (MRSA)。

純化方法

親和層析。 Protean Ltd. 提供的酶是在符合 ISO 9001 和 ISO 13485 國際標(biāo)準(zhǔn)的認(rèn)證環(huán)境中生產(chǎn)的，符合下游 GMP 認(rèn)證流程的使用條件。

公式

儲存緩沖液：10mM Tris (pH 7.5)、50mM KCl、1mM DTT、0.1mM EDTA、0.1% Triton、50% 甘油。 10x 反應(yīng)緩沖液：專有優(yōu)化緩沖液，含有 100mM Tris-HCl (pH 8,8)、(NH4)2SO4、KCl、MgSO4 和 1% Triton X-100。

特異性

脫氧核糖核酸、核糖核酸

貯存

儲存在-20℃