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大鼠羥脯氨酸(Hyp)酶聯免疫檢測試劑盒說明

更新時間:2023-07-10      點擊次數:358

 用于大鼠血清、血漿及相關液體樣本中羥脯氨酸(Hyp)測定。

作原理

本試盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法 (ELISA) 測定樣品中 鼠羥脯氨酸(Hyp)水平。向預先包被了大鼠羥脯氨酸(Hyp)單克隆抗體的酶標孔 加入大鼠羥脯氨酸(Hyp),溫育;溫育后,加入生物素標記的抗 Hyp 抗體。再 霉親和素-HRP 結合,形成免疫復合物,再經過溫育和洗滌,去除未結合的 然后加入底物 AB,產生藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色 深淺與樣品中大鼠羥脯氨酸(Hyp)的濃度呈正相關。

試劑盒組成

試劑盒組成

48 孔配置

96 孔配置

說明

1

1


封板膜

2 (48)

2 (96)


封袋

1

1


標包被板

1 ×48

1 ×96

2-8℃保存

標準品 80μg/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃保存

準品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

霉親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

物素標記的抗 Hyp 抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃保存

顯色劑 A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

顯色 B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

濃縮洗滌液

(20ml×20 ) × 1

(20ml×30 ) × 1

2-8℃保存

  

















需要而未提供的試劑和器材

1  37℃恒溫箱。

2.  標準規格酶標儀

3.  精密移液器及一次性吸頭

4.  蒸餾水,

5  一次性試管

6  吸水紙

意事項

1.  從 2-8℃取出的試劑盒,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少 30 分鐘。酶標包 板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

2  各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差

3. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

4  為避免交叉污染,要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。

5.  用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

6.  底物 B 對光敏感,避免長時間暴露于光下。

板方法

工洗板方法:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下 用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少 0.35ml注入孔內,浸泡 1-2 分鐘。根據需 要,重復此過程數次

洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中

標本要求

1不能檢測含NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的 (HRP) 活性。

2.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實 驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。

作程序

1. 標準品的稀釋: (本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小

試管中進行稀釋。)

40μg/L

5 號標準品

120 μ l 的原倍標準品加入 120 μ l 標準品稀釋液

2g/L

4 號標準品

120 μ l 的 5 號標準品加入 120 μ l 標準品稀釋液

10μg/L

3 號標準品

120 μ l 的 4 號標準品加入 120 μ l 標準品稀釋液

g/L

2 號標準品

120 μ l 的 3 號標準品加入 120 μ l 標準品稀釋液

2.5μg/L

1 號標準品

120 μ l 的 2 號標準品加入 120 μ l 標準品稀釋液

2. 根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空 孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。

3. 加樣:1) 空白孔,空白對照孔不加樣品,生物素標記的抗 Hyp 抗體,鏈霉 親和素-HRP,只加顯色劑 A&B 和終止液,其余各步操作相同2) 標準品孔: 加入標準 50ul,鏈霉親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體, 故不加);3) 代測樣品孔:加入樣本 40ul,然后各加入 Hyp 抗體 10ul 鏈霉親和-HRP50ul,蓋上封板膜,輕輕震蕩混勻,37℃溫育 60 分鐘。

4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用。

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后 棄去,如此重復 5 次,拍干。

6. 顯色:每孔先加入顯色劑A50ul,再加入顯色劑 B50 μ l,輕輕震蕩混勻,37℃ 避光顯色 15 分鐘.

7. 終止:每孔加終止液 50 μ l終止反應 (此時藍色立轉黃色)。

8. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度 (OD 值) 。  測定應 在加終止液后 10 分鐘以內進行。

9. 根據標準品的濃度及對應的OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據 OD 值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟 來計算。

操作程序總結:



1.準備試劑,樣品和標準品

2.加入準備好的樣品和標準品,生物素標記的二抗和酶標試劑,37℃反應60分鐘

3.洗板5次,加入顯色液A、B,37℃顯色15分鐘

4.加入終止液

5.10分鐘內讀OD值

6.計算

劑盒性能:

1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數 R 值為 0.92 以上。

2.批內與批間應分別小于9%和 15%

測范圍:

測范圍:0-40μg/L

存條件及有效期:

存:2-8℃。

有效期:6 個月(2-8℃)。



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